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腸道病毒滅活檢測

作者:小編 更新時間:2023-08-03 點擊數(shù):

EV71是人腸道病毒的一種,是引起嬰幼兒HFMD主要病原體之一。由于該病毒具有脊髓前角神經(jīng)組織嗜性,因而可以引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染(無菌性腦炎和腦膜炎、脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹)。

EV71為單股正鏈RNA病毒,屬于小RNA病毒目小RNA病毒科腸道病毒屬,基因組全長大約7500個堿基,僅有一個開放讀碼框架,編碼一-個多聚蛋白,這一多聚蛋白經(jīng)進一步水解剪切后產(chǎn)生病毒的4個結(jié)構(gòu)蛋白(VP1-VP4)和7個非結(jié)構(gòu)蛋白(2A-2C 和3A-3D),兩側(cè)為5'和3'非編碼區(qū)(UTRs)。咨詢電話:13816144967(微信同號)

圖片1.png

 

EV71滅活疫苗(人二倍體細(xì)胞)滅活工藝驗證

目的:

對腸道病毒71型(enterovirus 71,EV71)滅活疫苗(人二倍體細(xì)胞)的滅活工藝進行驗證。

方法:

3批次經(jīng)甲醛滅活的EV71滅活病毒收獲液樣品,分別連續(xù)盲傳4代,并設(shè)病毒對照盲傳4代。觀察每代次樣品的細(xì)胞病變情況,采用微量滴定法檢測病毒感染性滴度,ELISA法檢測EV71特異抗原含量,實時定量PCR法檢測病毒核酸水平及病毒負(fù)鏈產(chǎn)生情況。

結(jié)果:

3批滅活的疫苗病毒收獲液樣品經(jīng)4次盲傳后,各代次均未出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變,經(jīng)微量滴定法均未檢測到EV71感染性滴度。滅活的病毒收獲液盲傳至第2代時,病毒負(fù)鏈檢測已為陰性;至第3代時,EV71抗原檢測為陰性;至第4代時,病毒核酸檢測為陰性。病毒對照經(jīng)盲傳4代后,各代次均出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變;自第2代開始,感染性滴度維持在106~107 CCID50/ml,抗原含量為200~370 U/ml,且均可檢測出明顯的病毒核酸及病毒負(fù)鏈增殖。

結(jié)論通過經(jīng)典的"細(xì)胞上盲傳3代"的檢測方法,并結(jié)合實時定量RT-PCR對病毒核酸和負(fù)鏈進行檢測,證實經(jīng)甲醛滅活的EV71滅活疫苗樣品已完全滅活。

 

EV71 滅活疫苗具有良好的免疫原性

接種EV71滅活疫苗可刺激機體產(chǎn)生抗EV71的免疫力,用于預(yù)防EV71感染所致的 手足口病。EV71滅活疫苗接種后28天,血清抗體陽轉(zhuǎn)率為88.1%~100%。目前關(guān)于EV71疫苗免疫持久性研究數(shù)據(jù)有限,根據(jù)對Ⅲ期臨床研究對象的跟蹤觀察,接種后56天至8個月,EV71中和抗體滴度有所下降,8~14個月抗體水平處于相對穩(wěn)定狀態(tài),但抗體陽性率未見下降。免疫后兩年的觀察結(jié)果顯示,中和抗體水平和臨床保護效力仍然維持在較高水平。接種2劑次EV71滅活疫苗對于EV71感染相關(guān) 手足口病的保護效力為90%~97.45%,對于EV71引起的相關(guān)疾病的保護效力為80.4%~88.0%。對柯薩奇病毒A16型(CV A16)和其他腸道病毒感染 手足口病無保護效力。不同基因型毒株的免疫原性研究結(jié)果顯示,疫苗株對EV71不同基因型和亞型具有交叉保護作用。咨詢電話:13816144967(微信同號)


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