犬腺狀病毒滅活檢測

犬腺病毒(Canine adenovirus，CAV)分為CAV-I和CAV-Ⅱ。CAV-I引起犬的傳染性肝炎，CAV-Ⅱ則引起犬的傳染性喉氣管和腸炎。各個年齡段的狗都有可能被感染，但幼犬最易感，死亡率較高。最重要的傳染源是病犬和康復犬，它們從尿液、糞便、呼吸道分泌物和唾液中向外界排毒。其他犬類可通過接觸病犬和病毒感染性物質感染，主要感染途徑為消化道和呼吸道。懷孕的狗可以通過胎盤感染胎兒，并導致新的小狗死亡，潛伏期左右各7天。大多數幼犬是急性的，1- 2天后死亡。成年狗傾向于在7天內康復，沒有并發(fā)癥。 咨詢電話: 13816144967 (微信同號)

狂犬病病毒糖/核等結構蛋白的重組CAVⅡ型病毒的免疫原性

1．在 MDCK細胞上大量制備狂犬病病毒糖/核等結構蛋白的重組犬Ⅱ型腺病毒，測定TCIDso。以無免疫史的家犬為受試動物，每條犬肌肉注射0.2ml TCIDs.為10°的重組病毒;同時以犬Ⅱ型腺病毒疫苗株免疫犬作為對照組。

2．免疫后1周開始每隔1周采集和分離免疫犬及對照犬血清一次。

3．采用間接ELISA方法，即以純化的狂犬病病毒作為抗原包被酶標板，待檢免疫犬血清與之反應，再以辣根過氧化物酶標記的羊抗犬二抗結合并顯色。結果表明，重組病毒免疫后狂犬病病毒（糖/核等結構蛋白）特異性抗體顯著升高。

4．采集核蛋白重組苗免疫后4周犬的抗凝血液，按2×0.1ml分裝入2個離心管中，加入紅細胞裂解液，感作后離心，沉淀用0.2mlPBS 懸浮，將FITC標記的羊抗犬CD4+和 CD8+抗血清分別與PBS懸浮的白細胞4℃感作1h，經 PBS洗滌⒉次后懸浮進行FACS檢測。結果表明,免疫犬CD4+數量較對照組顯著增高，CD4+/CD8+比值顯著增加。說明，重組苗中核蛋白誘導了水平較高的細胞免疫。

狂犬病病毒糖/核等結構蛋白的重組CAV-Ⅱ型病毒誘導產生抗體的中和試驗作用及免疫保護作用

取前一試驗中對照組及免疫組犬血清各100 u l,各與35 LDa狂犬病強毒CVS細胞毒混合，室溫孵育3h后，后肢皮下注射BALB/c乳鼠各40只，每只10ul，觀察4周。結果顯示，與對照組犬血清共孵育的CVS造成全部40只乳鼠發(fā)病死亡，而重組病毒免疫犬血清孵育組無發(fā)病致死。說明該重組CAV-Ⅱ誘發(fā)機體產生的糖/核等結構蛋白抗體具有顯著的中和作用。

從以上結果可以得出，本發(fā)明的積極效果在于重組病毒是通過將攜帶狂犬病病毒糖/核等結構蛋白表達盒的重組全基因組 DNA 序列轉染犬Ⅱ型腺病毒E3區(qū)易感細胞（即MDCK 細胞系）中獲得的。其無需進行大量復雜的病毒分離、鑒定和純化工作。同時本重組疫苗除了具有犬Ⅱ型腺病毒的生物學和免疫學特征以外，還展現(xiàn)了狂犬病病毒糖蛋白或核蛋白的免疫學特性，即除了可刺激機體產生針對犬腺病毒的免疫力以外，還可產生針對狂犬病病毒的免疫力，實現(xiàn)了外源基因的持續(xù)穩(wěn)定表達。咨詢電話: 13816144967 (微信同號)