白色念珠菌基因編輯
白色念珠菌(Monilia albican),是一種真菌,通常存在于正常人口腔,上呼吸道,腸道及陰道,它屬于導致人類高死亡率的四大病原真菌之一,是世界上第二常見的機會性真菌感染因子。白色念珠菌是人體腸道微生物群(共棲真菌)的一部分,但它也引起健康個體的粘膜感染和免疫防御能力減弱的個體(免疫功能低下的個體和接受器官移植、接受嚴重手術或遭受嚴重創(chuàng)傷的患者)的嚴重機會性感染。咨詢電話:13816144967(微信同號)
傳統(tǒng)λRed同源重組法
白色念珠菌基因敲除的傳統(tǒng)方法是利用其自身的Rec A同源重組系統(tǒng)編碼的RecA和RecBCD蛋白介導DNA的同源重組。但是以該系統(tǒng)為基礎的基因打靶存在較多的缺點:首先,由于RecBCD具有核酸外切酶活性,線性的打靶DNA將被降解,打靶基因必須整合于戴體上才能進行同源重組;其次,打靶片段需要較長的同源臂,往往長達幾百個堿基,而且同源重組效率低,往往不能得到所需的重組子。
CRISPR/Cas9基因編輯技術:
CRISPR-Cas9基因編輯技術就是通過人工設計的 sgRNA(guide RNA)來識別目的基因組序列,并引導 Cas9 蛋白酶進行有效切割 DNA 雙鏈,形成雙鏈斷裂,損傷后修復會造成基因敲除或敲入等,最終達到對基因組DNA 進行修飾的目的。相較于傳統(tǒng)的同源重組敲除基因的方法,CRISPR-Cas9基因編輯技術速度更快,無痕,結果更準確,非常便于您開展后續(xù)的實驗研究。
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