貓皰疹病毒滅活檢測
貓皰疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus type 1,FHV-1)是引起貓科動(dòng)物發(fā)生貓傳染性鼻氣管炎(Feline infectious rchinotracheitis,FIR)的病原,是皰疹病毒科、α-皰疹病毒亞科、水痘皰疹病毒屬的雙鏈DNA病毒。該病毒在世界范圍內(nèi)普遍流行,具有高度種屬特異性。FHV-1感染動(dòng)物后,常潛伏于動(dòng)物體的三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi),極易形成隱性感染并終生排毒,呈周期復(fù)發(fā),對貓及獵豹、虎等野生貓科動(dòng)物的健康造成嚴(yán)重威脅。在我國寵物貓飼養(yǎng)量與日俱增的今天,飼養(yǎng)場等小環(huán)境中一旦存在帶毒貓,便會(huì)造成易感幼貓的不斷感染,將會(huì)導(dǎo)致該病在該地區(qū)不間斷流行。咨詢電話: 13816144967 (微信同號(hào))
貓皰疹病毒滅活檢測項(xiàng)目：
FHV-1病毒滅活檢測、FCV、支原體 、Bb、衣原體。
貓皰疹病毒滅活檢測方法：
本實(shí)驗(yàn)以自主分離鑒定的毒株制備疫苗,為研發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的疫苗奠定基礎(chǔ)。在本研究中,以本實(shí)驗(yàn)室前期分離鑒定的FHV-1 CH-B株為種毒株,擴(kuò)大培養(yǎng)后獲得病毒效價(jià)為10~(7.84) TCID_(50)/m L的FHV-1 CH-B株病毒液。
選取不同濃度的甲醛、二乙烯亞胺(BEI)和β-丙內(nèi)酯(BPL)分別對FHV-1 CH-B株病毒液進(jìn)行滅活,篩選滅活劑,最終滅活條件被確定為:FHV-1 CH-B株病毒液與體積分?jǐn)?shù)為0.2%甲醛混勻后,于120r/min的37℃恒溫?fù)u床中滅活48 h。將甲醛滅活后的FHV-1 CH-B株病毒液分別與AL(OH)_3佐劑和CRM佐劑進(jìn)行混勻,注射到小鼠體內(nèi),通過檢測小鼠體內(nèi)血清抗體(IgG)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、γ干擾素(IFN-γ)、腫瘤壞死因子(TNF-α)的含量,以及中和抗體效價(jià)來篩選佐劑,確定AL(OH)_3佐劑為FHV-1 CH-B株病毒液滅活疫苗制備的佐劑。
FHV-1 CH-B株病毒液經(jīng)甲醛滅活后,與AL(OH)_3佐劑按9:1比例混勻,制備滅活疫苗。滅活疫苗經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)合格,無污染,注射小鼠和貓均未出現(xiàn)不良反應(yīng)。將病毒含量為10~(7.84)TCID_(50)/m L、10~(6.84)TCID_(50)/m L、10~(5.84)TCID_(50)/m L的FHV-1滅活疫苗,分別以皮下注射方式,按1m L/只的劑量免疫實(shí)驗(yàn)貓,每7 d采集貓外周血分離血清,采用間接ELISA方法測定血清抗體(IgG)含量、白細(xì)胞介素4(IL-4)、IFN-γ、中和抗體等指標(biāo),第21 d進(jìn)行二次免疫。第42 d利用實(shí)驗(yàn)室已建立的FHV-1感染幼貓模型進(jìn)行動(dòng)物攻毒試驗(yàn),根據(jù)實(shí)驗(yàn)貓的體溫、體重、臨床癥狀、排毒量、組織病變情況,篩選最小免疫劑量。結(jié)果表明,病毒滴度為10~(7.84)TCID_(50)/m L的FHV-1滅活疫苗,對實(shí)驗(yàn)貓的保護(hù)率為100%(5/5)。對滅活疫苗進(jìn)行安全性試驗(yàn),通過14 d的臨床觀察,各組實(shí)驗(yàn)貓的精神狀態(tài)、采食情況、主要生化指標(biāo)無異常變化,且未見不良反應(yīng),由此證明自制滅活苗安全性良好。咨詢電話: 13816144967 (微信同號(hào))
本研究成功制備了FHV-1 CH-B株滅活疫苗,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)及和安全性評價(jià),證明FHV-1 CH-B株滅活疫苗對FHV-1感染幼貓具有預(yù)防作用,為FHV-1疫苗的進(jìn)一步研究提供有效參考數(shù)據(jù)。
貓皰疹病毒滅活檢測樣品采集注意事項(xiàng)：
除有特殊說明外，所有實(shí)驗(yàn)用樣本采集，保存與運(yùn)輸均應(yīng)符合NY/T 541 獸醫(yī)診斷樣品采集，保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范。
采集寵物貓的口腔或鼻腔分泌物，加入樣品10%體積的PBS稀釋，過0.22μm過濾器,收集濾液,8000g離心10min，取上清液待檢查。
貓皰疹病毒滅活檢測周期：
通常情況下是在10-12個(gè)工作日之內(nèi)。咨詢電話: 13816144967 (微信同號(hào))
