新冠病毒滅活試驗方法
新冠病毒滅活試驗原理,是用細胞感染法測定消毒因子作用前后(或?qū)φ战M與實驗組)樣本中病毒的量。以細胞病變作為判斷指標,確定各組病毒的感染滴度,觀察消毒因子對新型冠狀病毒的滅活效果。咨詢電話: 13816144967 (微信同號)
1、懸液法病毒滅活試驗
a) 取待測消毒劑,用滅菌硬水稀釋至所需濃度的 1.25 倍,于 20 ℃±1 ℃水浴中備用。
b) 病毒懸液的制備:取出-80 ℃低溫保存的新型冠狀病毒,室溫解凍后,與有機干擾物按照 1:1 比例混合作為消毒劑滅活試驗用病毒懸液。
c) 消毒試驗:取上述病毒懸液1份加入4份待檢消毒劑,立即混勻并記時。作用至規(guī)定時間,立即取出 0.1 mL,加入經(jīng)鑒定合格的 0.9 mL 中和劑中混勻;或用經(jīng)鑒定合格的除藥方法處理。
d) 對照組試驗:陽性對照組為病毒對照組,觀察病毒生長是否良好,病毒滴度是否達到試驗要求;陰性對照組用細胞維持液作為陰性對照,觀察有無污染,細胞生長是否良好。
e) 以上各組按照終點稀釋法分別進行病毒滴度測定。試驗重復 3 次。咨詢電話: 13816144967 (微信同號)
f) 終點稀釋法:用細胞維持液對待滴定樣本做 10 倍系列稀釋,吸取樣液 100 μL,接種于單層細胞培養(yǎng)板上,每個滴度接種 4 孔。在 36 ℃±1 ℃放置 1 h~2 h 后,取出培養(yǎng)板,更換細胞維持液。繼續(xù)放入二氧化碳培養(yǎng)箱中(36 ℃±1 ℃,5%±1% 二氧化碳)培養(yǎng) 3-4 天,顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài),記錄細胞病變情況。
2、載體法病毒滅活試驗
a) 取待測消毒劑,置于 20 ℃±1 ℃水浴中備用。
b) 病毒載體的制備:取滅菌載體片,滴染新型冠狀病毒晾干備用。
c) 消毒試驗:取病毒載體置于消毒因子,作用至規(guī)定的時間后取出放入經(jīng)鑒定合格的中和劑或洗脫液 1.0 mL 中,作用 10 min,混勻洗脫。消毒器械載體布點應置于最難殺滅部位,具體方法參照《消毒技術(shù)規(guī)范》。
d) 對照組試驗:陽性對照組為病毒對照組,觀察病毒生長是否良好,病毒滴度是否達到試驗要求;陰性對照組用細胞維持液作為陰性對照,觀察有無污染,細胞生長是否良好。
e) 以上各組按照終點稀釋法分別進行病毒滴度測定。試驗重復 3 次。
f) 終點稀釋法:用細胞維持液對待滴定樣本做 10 倍系列稀釋,吸取樣液 100 μL,接種于單層細胞培養(yǎng)板上,每個滴度接種 4 孔。在 36 ℃±1 ℃放置 1 h~2 h 后,取出培養(yǎng)板,更換細胞維持液。繼續(xù)二氧化碳培養(yǎng)箱中(36 ℃±1 ℃,5%±1% 二氧化碳)培養(yǎng) 3-4 天,顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài),記錄細胞病變情況。
新冠病毒滅活試驗:結(jié)果評價
同時符合下列a)和b)的消毒因子判為消毒效果合格:
a) 去除殘留消毒劑效果的中和劑鑒定試驗合格;
b) 懸液滅活試驗,每次試驗對新型冠狀病毒應有效滅活,陽性對照組病毒滴度對數(shù)值應≥5.0或載體滅活試驗,每次試驗對新型冠狀病毒應有效滅活,陽性對照組病毒滴度對數(shù)值應≥4.0。咨詢電話: 13816144967 (微信同號)